硅藻土吸附固定化Bacillus sp.DL-2胞内蛋白酶拆分制备(S)-乙酸苏合香酯

[目的](S)-乙酸苏合香酯是手性药物合成的关键手性砌块,其在多种手性化合物的合成及医药、香料的工业生产中具有重要的作用.传统的化学合成手性化合物的方法需要有毒有机溶剂及重金属的参与,对环境及人类具有严重的危害,同时得到的手性化合物的光学纯度较低.与传统的化学合成相比,酶法选择性拆分消旋体化合物,具有高立体专一性和区域选择性、副反应少、产率高、产物光学纯度好以及反应条件温和的优点,是一种被广泛认可的拆分方法.实验表明,Bacillus sp.DL-2胞内蛋白游离酶可拆分制备(S)-乙酸苏合香酯,然而游离酶不易回收且稳定性差,将Bacillus sp.DL-2胞内蛋白游离酶制备成固定化制剂,克服了游离酶对环境敏感,稳定性不高的缺点,为工业化生产(S)-乙酸苏合香酯奠定了基础.[方法]酶的固定化方法主要有物理吸附法、离子结合法、共价结合法、交联法和包埋法.以吸附法固定酶,酶的构象很少改变,因此,酶的催化活力损失较少;且吸附法固定化操作过程简单,因此吸附法在经济上是最具吸引力的固定化方法.硅藻土由硅藻的细胞壁沉积而成,硅藻土表面的多孔性与负电性使其呈现明显表面吸附性,因而被常用做吸附载体.以硅藻土作为固定化载体,对Bacillus sp.DL-2胞内蛋白酶进行固定化,用以拆分制备高光学纯的(S)-乙酸苏合香酯.利用单因素实验优化,确定制备固定化酶的最佳固定化条件及制备(S)-乙酸苏合香酯的最佳拆分条件,并测定了制备的固定化酶对金属离子的敏感度及储存稳定性.[结果]最佳固定化条件为:温度40℃,pH为7,固定化时间10 h,载体添加量100 g/L.在最佳固定化条件下制备了固定化酶,优化确定了制备(S)-乙酸苏合香酯的最佳拆分条件为:固定化酶用量为160 mg/mL,拆分时间7 h,拆分温度30℃,缓冲液pH为7.[结论]在最佳固定化及拆分条件下,制备的(S)-乙酸苏合香酯e.e.值可达到96.8％,转化率为73.9％,且固定化酶对金属离子敏感度较低,对反应环境要求较低,适用于工业化生产.固定化酶在4℃条件下储存,随保存周数的增加,e.e.值及转化率均逐渐降低,但4周后e.e.值仍能达到90.1％,转化率保持在66.6％左右,具备较高的储存稳定性,为工业化生产(S)-乙酸苏合香酯提供了参考.     

不同光照条件对南大青叶(马蓝叶)中靛玉红含量的影响

[目的]研究不同光照条件对南大青叶中靛玉红含量的影响,为开展南大青叶规范化种植提供科学依据。[方法]设置全阴生、半阴生和阳生3个不同光照条件组别,于3月份定植后,观察植株生长状况,于5月至次年3月分别采收南大青叶,采用高效液相色谱法(HPLC)测定南大青叶中靛玉红的含量。[结果]南大青叶中靛玉红含量随种植时间不同波动较大,每个设置组组内不同月份的靛玉红含量均有极显著差异(P0.01);各设置组间仅11及12月份靛玉红含量无显著性差异(P0.05),其余月份不同设置组间均有显著差异(P0.05)。[结论]3种光照条件均适宜南板蓝的生长,但综合考虑光照对南大青叶靛玉红含量、植株生长和产量的影响,认为全阴及半阴条件更适宜种植南大青叶。     

急性胰腺炎严重度的CT评估

目的 探讨急性胰腺炎(AP)严重度的CT平估.方法 53例经手术或临床证实AP患者的CT进行回顾性分析,并对CT严重指数(CTSI)分级.结果 本组53例中0～3分33例,4～6分16例,7～ 10分4例.结论 CT检查对胰腺炎的诊断,确定坏死的部位、范围及临床的分型都有重要的作用.     

静脉应用洛赛克治疗新生儿上消化道出血疗效观察

目的：观察静脉应用洛赛克治疗新生儿上消化道出血的疗效。方法：将64例上消化道出血的新生儿随机分为洛赛克治疗组和对照组各32例，两组均作纤维胃镜检查，在积极治疗原发病和常规药物治疗基础上，治疗组静脉滴注洛赛克，首剂量为1．6mg／(kg．d)，策2天始0．8mg／(kg．d)．对照组静脉滴注甲氰咪哌5mg／(kg．d)。结果：治疗组和对照组比较，出血症状明显改善，洗出胃液和大便潜血转阴的时间明显缩短(P＜0．01)。结论：静脉应用洛赛克能有效治疗新生儿上消化道出血。     

中草药饲料添加剂存在的问题与对策

中草药饲料添加剂具有促进畜禽生长和保健作用,并具有无毒、无害、无残留、无耐药性的独特优点,顺应了人们对“绿色”浪潮的追求。但中草药添加剂开发中存在的问题必须加以解决。1中草药饲料添加剂存在的问题1.1中草药饲料添加剂的成本问题成本是制约中草药饲料添加剂应用的关键因素之一。虽然我国的天然中草药丰富,但常用的只有10%左右,许多中草药资源有限而且价格不菲,不利于中草药饲料添加剂的大规模、集约化生产。1.2中草药添加剂的剂型单一,科技含量不高市场上中草药饲料添加剂大部分为粉剂或散剂等粗制品,大多以原料粉碎搅拌后制成。…     

大孔树脂吸附-交联法固定脂肪酶

【目的】为基于大孔树脂吸附结合环氧交联剂交联法固定脂肪酶等工业用酶奠定基础。【方法】使用大孔树脂吸附,而后环氧交联剂交联的方法进行脂肪酶的固定化,研究各因素对吸附–交联固定化的影响,并采用响应面法对固定化条件进行优化,制备固定化酶并考察其稳定性。【结果】筛选出大孔树脂HPD750为载体,聚乙二醇二缩水甘油醚为交联剂。最佳固定化条件为:吸附温度45℃,给酶量60 mg·g–1,交联温度30℃,交联时间12.5 h,pH6.36,交联剂体积分数为0.7%。由上述条件制备所得的固定化酶活力为565.31 U·g–1,酶活力回收率为32.16%。与游离酶相比,固定化酶的热稳定性和酸碱稳定性均有明显提升;连续操作10次,固定化酶活力仍保留34.86%,操作稳定性较好;4℃条件下储存30 d,固定化酶活力仍保留64.81%。【结论】大孔树脂HPD750为载体,聚乙二醇二缩水甘油醚为交联剂制备的固定化脂肪酶热稳定性、酸碱稳定性均得到显著提升,且具有良好的操作及储存稳定性。     

尿毒清颗粒抑制大鼠肾脏间质纤维化作用靶点研究

目的 研究尿毒清抑制大鼠肾脏间质纤维化的作用。方法 采用单侧输尿管结扎术制备肾间质纤维化大鼠模型,将10周龄SPF级雄性大鼠60只,随机分3组：假手术（Sham,n=20）、模型组（UUO,n=20）和尿毒清治疗组（UNQ,n=20）;UNQ组于于术前1天给予尿毒清2 g/（kg·d）灌胃,假手术组及模型组每天灌胃等量生理盐水,各组分别于术后第3、7、14天处死5只大鼠,取梗阻侧肾脏进行组织学检查,对肾间质细胞浸润、肾小管萎缩和肾间质纤维化情况进行半定量评分;采用免疫组化、ELISA和Western Blot分别分析肾组织中转化生长因子β1（TGF-β1）、纤粘连蛋白（FN）表达。结果 与Sham相比,UUO大鼠各时间点的病理损害进行性加重,肾小管间质中TGF-β1、FN表达均增高（P<0.05）。与UUO相比,尿毒清治疗后3 d,可观察到大鼠的肾间质炎性细胞浸润、肾小管萎缩及肾间质纤维化（P<0.05）明显减轻,同时肾组织中TGF-β1表达减少（P<0.05）;治疗后7 d,上述治疗作用持续存在,同时进一步使UUO大鼠肾间质的FN表达下降（P<0.05）;治疗14 d后,肾间质细胞浸润情况评分（CIS）和慢性病变（包括肾小管萎缩和间质纤维化）评分（AFS）较UUO组分别下降22.2%和19.1%（P<0.05）,TGF-β1、FN的表达则较UUO组分别减轻30.8%和30%（P<0.05）。结论 尿毒清的保护作用表现在肾损伤的开始就通过减少TGF-β1表达从而使肾间质炎症细胞浸润受到抑制,同时还能减少病变肾组织细胞外基质的积聚,从而减轻肾间质纤维化。     

砭石热敷治疗输卵管阻塞性不孕症疗效观察

目的 观察砭石热敷联合毛冬青灌肠及频谱治疗对输卵管阻塞性不孕症的临床疗效。方法 将180例输卵管阻塞性不孕症患者随机分为观察组89例和对照组91例,观察组采用烫熨治疗砭石热敷+毛冬青灌肠+频谱治疗,每天1次,20 min/次,2周为1疗程。对照组采用毛冬青灌肠+频谱治疗,方法疗程同观察组。2组疗程均为3个月经周期,随访6个月。观察比较两组治疗后中医证候积分、临床疗效、生育力和不良反应。结果 两组患者治疗后中医证候积分较治疗前下降（P<0.05）（观察组带下异常除外）,观察组在改善小腹疼痛及腰骶胀痛方面优于对照组（P<0.05）;观察组治愈率优于对照组;两组患者治疗后生育力比较,观察组临床妊娠率高于对照组（P<0.05）;观察组患者腹泻等副反应比对照组减轻。结论 烫熨治疗砭石热敷在输卵管阻塞性不孕患者中的作用较为明显,且副作用小,值得临床推广应用。